低溫研磨機正確的實驗步驟分享

　　低溫研磨機又叫全自動多樣品冷凍研磨儀，和液氮粉碎機類似，原理就是先把常溫下呈韌性、難以粉碎的物質，冷凍到脆化點以下，然后在低溫研磨機內被研磨到所需的細度，而且原成分不會破壞。并且在常溫下易燃易爆的物質，也能低溫粉碎，效果更為顯著。

　　工作原理：

　　低溫研磨機利用低溫凍結力，機械撞擊力，物里摩擦力將樣品磨碎。

　　系統構成：

　　低溫研磨機擁有五大系統，樣本研磨系統、液氮貯存系統、液氮控制系統、電路控制系統、保溫及保冷系統。

　　應用范圍：

　　低溫研磨機廣泛運用于生物/食物/農業/醫藥品/化學/合成材料/工程/電子/建筑原料/玻璃/陶瓷等行業。

　　低溫研磨機實驗步驟：

　　1、先將低溫研磨機上的制冷模塊預先置于-20℃，使用時取出安裝好。將研磨珠去RNA酶處理。

　　2、隨機抽取小鼠的尾巴100μg，把樣本剪成盡可能小段，置于無RNA酶的2研磨單位離心管中（選擇耐液氮冷凍管子），同時加入1顆5號研磨珠和2顆3號研磨珠（如果選擇1.5研磨單位離心管，只需要加入4-5顆3號研磨珠）。

　　3、放置于液氮中一起浸泡3分鐘，取出放置于預冷模塊中，在低溫研磨機上選擇13單位頻振研磨60s。（該步驟可以根據研磨的細微程度要求可以再重復一遍）。

　　4、把研磨好的樣本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此處選擇PBS，可以根據實驗需要加入其他提取液，如1ml TRIzol等），繼續置于低溫研磨機上選擇13單位頻振研磨60s。樣本將處于糊狀。（其他提取試劑有可能會出現泡沫，不影響實驗）。

　　5、取出研磨管，放入冷凍離心機中，于4度，12000g離心10分鐘。

　　6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨單位離心管中，蓋上管蓋，在室溫上孵育15分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明，如果仍有少量顆粒屬于正常情況，不影響RNA提取質量和得率。

　　7、在研磨單位離心管中加入0.02ml氯，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育15分種，于4度，12000g離心15分鐘。離心后混合物分層：上清層，中間層，下層；RNA存在于上清層中。

　　8、將上清層小心轉移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇，顛倒振蕩混勻，將混合的樣品在-20度條件，孵育20分種，于4度，12000g離心10分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著于管壁或管底。小心棄去上清，用1ML的冰浴75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌低溫研磨機的離心管管壁，并旋渦振蕩樣品，盡可能讓沉懸浮，于4度，12000g離心5分鐘，再次去除上清，晾干沉淀。

　　10、在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過分干燥，那樣會降底它的可溶性）。

　　11、低溫研磨機用適量（一般可用0.01—0.02ml）的無RNA酶水或TE溶液來溶解RNA。抽提好的RNA，保存于-70度。